恒奥德仪器活性氧检测仪操作步骤注意事项

基于荧光探针技术，通过检测细胞内活性氧（ROS）水平评估氧化应激状态。常用荧光探针为 DCFH-DA （2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐），其原理如下：

检测原理

DCFH-DA本身无荧光，可自由穿透细胞膜。进入细胞后被酯酶水解生成 DCFH ，DCFH因无法通透细胞膜而积聚于细胞内。细胞内ROS可氧化无荧光的DCFH生成有荧光的 DCF （二氯荧光素），荧光强度与ROS水平成正比。 ‌

操作步骤

‌探针装载‌

短时间刺激（2小时内）的细胞：先装载探针再刺激；长时间刺激（6小时以上）的细胞：先刺激再装载探针。 ‌

贴壁细胞采用原位装载（直接加入探针），悬浮细胞需收集后装载。 ‌

‌荧光检测‌

使用荧光显微镜、流式细胞仪或激光共聚焦显微镜，在激发波长480nm和发射波长525nm下检测DCF荧光强度。 ‌

注意事项

装载探针后需洗净残留未进入细胞的探针，避免背景干扰。 ‌

尽量缩短探针装载至检测的时间间隔，减少误差